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    「青蓮百奧」蛋白組學FAQ:WB的原理是什么?

    2020-11-30 00:00:00

    Western Blot采用的是聚丙烯酰胺疑膠電泳,待檢測物是蛋白質,“探針”是抗體,“顯色”用標記的二抗。SDS-PAGE可對蛋白質樣品進行分離,轉移到固相載體,例如硝酸纖維素薄膜(NC)上。固相載體可以吸附蛋白質,并保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。轉移后的NC膜就稱為一個印跡(blot)。用蛋白溶液(如5%BSA)處理,封閉NC膜上的疏水結合位點。用目標蛋白的抗體(一抗)處理NC膜(只有待研究的蛋白質才能與ー抗特異結合形成抗原抗體復合物),這樣清洗除去未結合的一抗后,只有在目標蛋白的位置上結合著一抗。用一抗處理過的NC膜再用標記的二抗處理(二抗是指一抗的抗體),處理后,帶有標記的形成抗體復合物可以指示一抗的位置,即是待研究的蛋白質的位置。

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