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  • 蛋白質組學

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    蛋白質組學,糖基化蛋白質組學,多組學聯合分析
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    「青蓮百奧」秘笈在手,酶解無憂,你想要的全都有!

    2019-08-20 00:00:00

    mmexport1607317720583.jpg在質譜鑒定中,最關鍵的就是對樣品的前處理,它的目的在于減少人為降解和修飾,釋放盡可能多的肽段。由于質譜鑒定蛋白的方式都是針對肽段的鑒定,因此,酶切蛋白這一步很關鍵。在樣本合格情況下,酶切覆蓋度越廣,能鑒定的肽段就越多,匹配的蛋白就越多越準確!接下來,隨小編一起瀏覽“秘笈”吧~~~

    糖基化蛋白質組學

    【秘笈簡介】

    蛋白酶本質都是蛋白質,亦是由20多種氨基酸組成的蛋白質分子,它們能催化蛋白質和多肽分子內的酰胺鍵(肽鍵)的水解。蛋白酶往往都有自己特異的作用位點,能夠將蛋白特異性酶切成若干肽段,因此,在蛋白組學研究中,蛋白酶的選擇也顯得極為重要。經酶切后,由7-35個氨基酸組成的多肽,較適用于LC/MS/MS。

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    【秘笈核心 】

    “秘笈”的核心小編為大家整理了質譜中常見的不同蛋白酶的類型和蛋白酶相對應的作用位點一覽表,供大家查閱:

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    【秘笈修成】

    利用序列特異性蛋白酶,可將蛋白質切割成更小的片段或多肽,將兩種蛋白酶的片段化方法進行結合可以提高序列的覆蓋率。例如,混合使用胰蛋白酶與Lys-C/Glu-C等,要比單獨使用胰蛋白酶提高序列的覆蓋率10 %左右,組合使用可以提高質譜分析時碎片離子的完整性,而且使得子離子系列具有一定的方向性,便于識別和讀取,從而更有效判定鑒定序列的準確性。
    蛋白酶的酶切位點大都是有一定特異性的,據此,可以選擇相應的蛋白酶進行酶切。如果待測蛋白序列是已知的,可以利用在線分析網站
    (https://web.expasy.org/peptide_cutter/或者proteinprospector)。

    打開
    https://web.expasy.org/peptide_cutter/,輸入上傳你要酶切的蛋白序列和所用到的酶就可以模擬切出相應的肽段啦!

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    proteinprospector網站,可在主頁點擊“MS-Seq”,設置樣本信息、蛋白酶類型和一些質譜參數即可得出結果,詳細使用內容可點擊主頁“Instructions”,里邊包括所有功能的使用介紹!O(∩_∩)O~

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    這期的蛋白組學——酶切“秘笈”已總結分享給大家,希望對各位小伙伴有一定的幫助和啟發,喜歡這篇文章的小伙伴歡迎轉發,分享給身邊的朋友,有任何蛋白組學問題記得聯系我們喲,青蓮百奧將持續為大家分享和提供前沿動態和技術服務!

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