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    【客戶案例分享3】:何首烏肝毒性研究

    2020-11-03 00:00:00
    【客戶案例分享3】:何首烏肝毒性研究
    詳細介紹:

    何首烏肝毒性研究


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    The journal of Cellular Physiology and Biochemistry.;October 24, 2017. IF=5.1,單位:中國中醫科學院,北京中醫藥大學

    【研究內容】

    研究背景:何首烏作為有名中藥有益于體液循環,同時對腎臟頭發和胡須等都有好處。但臨床報告表明何首烏可能會帶來肝毒性,引起研究者的注意,本研究旨在研究何首烏引起肝毒性的臨床標志物和具體分子機制。


    組學技術:iTRAQ標記定量蛋白質組學


    儀器類型:Q Exactive質譜儀


    實驗分組:control組,總提取物、水提取物、30%乙醇提取物、70%乙醇提取物和二氯甲烷提取物分別處理組


    樣本類型:肝臟組織蛋白提取物


    研究思路

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    研究結果速讀

    研究者利用不同萃取方法得到不同組分的何首烏萃取物(總提取物,水提取物,30%乙醇提取物,70乙醇提取物和二路甲烷提取物),通過對大鼠進行定時定量喂養不同的何首烏提取物,在喂養第90天進行血清/組織學檢測和抗氧化指標檢測來評判何首烏的肝毒性影響,同時進行iTRAQ定量蛋白質組學檢測。iTRAQ定量蛋白質組學共檢測到23619個肽段,鑒定出2040種蛋白,對各個實驗組的差異表達蛋白進行生物信息學分析。五組共有GO富集結果中:BP主要包括代謝物和能量的前體物質合成、電子傳遞過程及有機物合成;CC主要與線粒體相關的成分;MF主要包括RNA及核苷酸結合、無機鹽離子跨膜轉運等;五組共有的KEGG富集結果包括:氧化磷酸化,帕金森,PD/HD/AD老年退行性疾病。5組共有的差異蛋白共有31個,將共有差異蛋白進行PPI相互作用分析,主要包括一下幾個方面:剪接體的消化和吸收,新陳代謝,氧化磷酸化,細胞凋亡,甲狀腺素信號通路;

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    (圖1)蛋白質組學生物信息分析


    結合生物信息學內容,差異表達蛋白中NADH家族中Ndufv3參與氧化磷酸化過程中電子的傳遞過程,與線粒體的損傷和細胞凋亡相關,而MCT-8/Slc16a2主要負責甲狀腺素T3/T4的轉運,表達常下降也會引起細胞凋亡,因此Ndufv3和Slc16a2作為候選的臨床biomarker進行WB驗證。WB結果與iTRAQ結果一致,Ndufv3在何首烏不同提取物處理組表達量上調,Slc16a2表達量下調。


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    (圖2)WB與QPCR結果驗證


    研究結論:

    iTRAQ蛋白質組學研究發現,PM的肝毒性主要與氧化磷酸化途徑有關。NADH脫氫酶家族蛋白和Slc16a2可能是由PM產生的肝毒性的潛在生物標志物。


    青蓮百奧服務項目:

    iTRAQ定量蛋白質組學,WB分子驗證。



    iTRAQ技術是由美國應用生物系統公司(Applied Biosystems Incorporation,ABI)2004年開發的同重標簽標記的蛋白相對定量技術。該技術采用4種或8種同位素的標簽,通過特異性標記多肽的氨基基團,然后進行串聯質譜分析,可同時比較4種或8種不同樣品中蛋白質的相對含量。



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