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    葡萄液泡蛋白知多少?

    2020-11-03 00:00:00
    葡萄液泡蛋白知多少?
    詳細介紹:

    青蓮百奧質譜平臺助力客戶發表一篇蛋白組學文章,主要研究葡萄果實發育到成熟過程中液泡內蛋白的變化情況。


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    液泡在果實生長和成熟中發揮著重要作用,但其蛋白質組學研究在很大程度上是未知的。文章中,從赤霞珠果實發育的第1階段到第三階段中,從葡萄肉組織中分離出完整液泡進行定量蛋白質組學分析,結果顯示鑒定出2533個蛋白質。其中1443個被鑒定為核心蛋白組,采用隨機的FC>1.5和p<0.05的順序配對比較,有1820個蛋白為顯著差異蛋白質(DAPs)。
    文章通過滲透裂解原生質體分離葡萄漿果液泡的方案,成功地從赤霞珠果實的果皮組織的原生質體中分離完整的液泡,并選取五個采樣日期,分別為開花后的30 天,52 天,66 天,77 天和96 天,用于漿果生理參數測定和果皮細胞液泡分離。每個時間點進行了三次生物學重復,覆蓋了漿果發育的三個主要階段。如下圖:收集到的漿果釋放出的原生質體顯示如圖A,通過不連續的 Ficoll 梯度離心進一步濃縮分離液泡如圖B,從頂部和中間梯度層的界面輕輕地收集液泡區。圖C是用中性紅染料染的粗液泡制品,圖D用中性紅染料染富集液泡樣品,箭頭指液泡,虛線箭頭指液泡膜,顯示出液泡的完整性。圖 E和 F顯示 P-ATPase和V-ATP (穿過液泡膜運輸的兩種類型的質子泵)的相對活性,證實了液泡富集成功。


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    采用無標記定量法,將所有鑒定的蛋白質分類為 11 個主要類別。其中轉運蛋白是第五大蛋白組,占總識別蛋白的8.9%。從圖中也可看出葡萄果實在發育和成熟過程中液泡蛋白質的持續變化。

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    通過GO分析,從葡萄漿果發育的五個采樣日期中鑒定的差異豐富蛋白主要分為八大類(圖A所示)。并且將兩兩進行比較,突出顯著差異蛋白的增加和減少情況(圖B所示)。

    640 (1).jpg根據TCDB數據庫,又將差異顯著的轉運蛋白分成七類。圖中顯示出大多數差異顯著的轉運蛋白在葡萄果實成熟期含量?第1高。

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    隨著葡萄漿果發育和成熟過程中一些關鍵轉運蛋白豐度的變化規律如下圖。

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    文章利用定量的蛋白質組學的分析,呈現出了第1個全面的葡萄果實液泡蛋白的變化模式。核心蛋白質組的發現揭示了常規的液泡膜蛋白和液泡蛋白群體。核心蛋白質組的功能分類表明,在葡萄發育過程中,液泡的常規溶解功能一直維持在果肉細胞的中央液泡內。從第 I 階段后期到第 II 階段中期檢測到重要的蛋白質組轉變,揭示了葡萄果實發育的第1次轉變期間蛋白質組的顯著變化,提供了有關表型滯后期生物學變化的新信息。實驗結果還顯示了大部分質子泵及其他轉運蛋白在果實成熟之前大量增加,為后期代謝物的積累提供了進一步的證據。


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